Noções sobre Preparação de Lâminas Histológicas
A histologia é o ramo da anatomia que estuda os seres vivos, de uma forma microscópica, tratando da estrutura e das funções do corpo. Além disso, o corpo é constituído por células, matriz extracelular e o fluido extracelular.
Nesse contexto, é necessário compreender quais são as técnicas desenvolvidas para preparar os tecidos a serem estudados, para que mantenham um aspecto próximo ao do material vivo. As etapas envolvidas são fixação, desidratação e diafanização, inclusão, microtomia, montagem e coloração.
FIXAÇÃO
A fixação é o tratamento do tecido com agentes que mantêm a sua arquitetura normal. O formol e o líquido de Bouin são os agentes fixadores mais utilizados em microscopia óptica, pois mantem uma imagem do tecido semelhante à in vivo, através das ligações transversais entre as proteínas.
DESIDRATAÇÃO E DIAFANIZAÇÃO
A maioria dos tecidos é composta por água, por isso são necessários banhos de álcool em concentrações crescentes a fim de obter a desidratação. Após a desidratação, há o tratamento dos tecidos com xilol, para que os tecidos tronem-se transparentes, processo conhecido como diafanização.
INCLUSÃO
É necessário que o histologista inclua os tecidos em um meio apropriado e realize cortes finos, para que seja possível distinguir as células de um tecido da matriz extracelular. A Parafina é um meio de inclusão em microscopia óptica. O tecido deve ser colocado em um recipiente que contenha parafina, para que o mesmo seja totalmente infiltrado. Após ser impregnado com a parafina, o tecido deve ser colocado em outro recipiente com parafina fundida, até que haja um bloco de parafina contendo o tecido.
MICROTOMIA
A microtomia é realizada após ter sido removido o excesso em material de inclusão. A mesma é efetuada com a utilização de um micrótomo, um aparelho que faz cortes microscópicos, variando geralmente de 5 à 10 μm (micrômetros) de espessura, em pequenas amostras de material biológico (geralmente tecidos) em blocos de resina específica (parafina) para análise em microscópio óptico. Além disso, a microtomia pode ser efetuada em espécimes congelados, sendo os blocos de tecido cortados a -20º C com uma lâmina de aço pré-resfriada. Os cortes são colocados em lâminas de vidro pré-resfriadas e corados com corantes.
MONTAGEM E COLORAÇÃO
Os cortes são cortados com uma lâmina de aço e montados em lâminas de vidro revestidas com adesivo. Geralmente, muitos constituintes dos tecidos têm praticamente a mesma densidade óptica. Então, esses constituintes precisam ser corados para a microscopia óptica. Nesse tipo de microscópia, são utilizados geralmente corantes solúveis em água. Logo, a parafina deve ser removida do corte e o tecido é reidratado e corado. Após a coloração, o corte é desidratado para permitir que uma lamínula seja afixada, utilizando um meio de montagem adequado. A lamínula protege o tecido de danos e é necessária para a observação do corte ao microscópio.
Os corantes podem ser divididos em três classes:
* Corantes que diferenciam os componentes ácidos e básicos da célula
* Corantes especializados que diferenciam os componentes fibrosos da matriz extracelular
* Sais metálicos que precipitam nos tecidos formando depósitos de metal
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Tratado de Histologia - Gartner & Hiatt - 2ª Edição